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蝦堿性磷酸酶(Shrimp Alkaline Phosphatase,SAP)

產品編號 產品名稱 規格 價格(元) 說明書
C4901A 蝦堿性磷酸酶(SAP) 500U 200
C4901B 5,000U 1,500
蝦堿性磷酸酶(Shrimp Alkaline Phosphatase,SAP)催化DNA和RNA 的5’和3’磷酸單脂的去磷酸化反應,也可水解核糖和脫氧核糖核苷三磷酸(NTP 和 dNTP)。該酶在分子生物學研究中應用廣泛,如去除DNA和RNA 末端的磷酸基團,用于后續的克隆和探針末端標記。在克隆中,載體經蝦堿性磷酸酶去磷酸化后因5’ 端無磷酸基團,因而不可以和自身3’ 端連接。蝦堿性磷酸酶可作用于5’突出端、凹陷端和平末端,也可用來降解PCR反應中的游離dNTP,用于制備測序模板和SNP分析。該蝦堿性磷酸酶在65℃溫育5分鐘即可完全的、不可逆的失活,因此,在連接或末端標記之后,可以不用去除。基于以上特性,該酶是傳統去磷酸化酶--小牛腸堿性磷酸酶的絕佳替代物。

組分

組分名稱 500U
Shrimp Alkaline Phosphatase (5 U/μl) 100 μl/1 ml
10×SAP Buffer 1 ml/10 ml

應用

  • DNA 和 RNA 的去磷酸化
  • 防止克隆載體的自連
  • 制備5′末端標記模板
  • 去除 PCR 產物中的 dNTP 和焦磷酸鹽
  • 活性定義

    1單位指在25℃條件下,30分鐘能使1μg經 HindIII(產生5’突出末端)消化的 pUC19 DNA 去磷酸化所需的酶量。去磷酸化標準是指在自連接反應中能抑制>95%的DNA 再連接。

    儲存

    -20℃可保存3年。

    使用注意事項

    (1)1×SAP Buffer:50 mM Bis-Tris HCl pH 6.0,1mM MgCl2,0.1 mM ZnCl2,25℃ 溫育。
    (2)熱失活:65℃ 加熱 5 分鐘,不可逆失活。該酶通常用于酶切載體的去磷酸化,因其不可逆熱失活特性。當完成去磷酸化反應后,無需再純化產物,可以直接用于后續連接反應。
    (3)蝦堿性磷酸酶也可以用來降解PCR反應中的游離dNTP,用于制備測序模板和 SNP 分析。同樣無需純化,可直接用于下游實驗。
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