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Exonuclease III

產品編號 產品名稱 規格 價格(元) 說明書
C5026 Exonuclease III 2500U 200 exonuclease iii說明書
25KU 1,500
核酸外切酶 III來源于E.coli,具有3′-5′外切酶活性,它作用于雙鏈 DNA,從 3′ OH 末端方向逐步切去單核苷酸;每次酶與底物結合催化,只有幾個核苷酸被除掉,從而在 DNA 分子群內產生漸進缺失。該酶的最佳底物為平末端、5′突出末端雙鏈DNA分子,但也可作用于雙鏈DNA的缺刻處,從3′降解DNA分子,釋放5′單核苷酸。對于3′突出末端,尤其是多于4nt的幾乎完全不切割, 亦不能切割硫代磷酰脂鍵。核酸外切酶 III 的活性部分依賴螺旋結構,并根據序列的不同而有差異(C>A=T>G)。另外,核酸外切酶 III還具有脫嘌呤/嘧啶-核酸內切酶活性、RnaseH活性和3′磷酸酶活性。

組分

名稱 數量
Exonuclease III (100 U/μl) 25 μl/250 μl
10X Exonuclease III Buffer 1 ml

應用

  • 非定向巢式缺失
  • 定點突變
  • 鏈特異性探針的制備
  • 制備用于雙脫氧測序的單鏈底模板
  • 單位定義

    50 μl 反應體系中,37℃ 條件下,30 分鐘 催化E.coli DNA 產生 1 nmol 酸可溶性產物所需要的 量定義為一個活性單位。

    1X Exonuclease III Buffer

    10 mM Bis-Tris(pH 7.0),10 mM MgCl2,1 mM DTT。

    酶儲存液

    50 mM Tris-HCl (pH 8.0), 50 mM KCl, 1 mM DTT, 50% Glycerol.

    熱失活

    70°C 20min。

    儲存

    置于-20°C,可保存3年。

    實例

    exonuclease III exonuclease III
    Fig 1:分別用不同的內切酶切質粒DNA產生5'突出末端、平末端和3'突出末端產物,然后用Exonuclease III(2.5U)分別酶切這三種產物(5 μg),將酶切產物瓊脂糖電泳。泳道1:5'突出末端產物;泳道2:平末端產物;泳道3:3'突出末端產物;M:DNA Marker 10000。   Fig 2:EcoR V酶切pUC57質粒獲得酶切產物,然后分別用不同量的Exonuclease III酶切該產物獲得漸進缺失產物。泳道1:對照(不加Exonuclease III); 泳道2:0.312U Exonuclease III; 泳道3:0.625U Exonuclease III; 泳道4:1.25U Exonuclease III; 泳道5:2.5UExonuclease III; M:DNA Marker 10000。
     
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