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pCold-SUMO-10His原核蛋白表達試劑盒

產品編號 產品名稱 規格 價格(元) 說明書
C1801M(停售) pCold-SUMO原核蛋白表達試劑盒 1 kit 4000
C1801H pCold-SUMO-10His原核蛋白表達試劑盒 1 kit 4800
本試劑盒所包含的原核表達載體(pCold-SUMO-10His)是在pCold-SUMO載體基礎上改造而成(HaiGene專利),該載體啟動子(CS Promoter)來源于南極嗜冷細菌,在低溫下(15度)才能啟動蛋白的表達。低溫下細菌生長緩慢,使得蛋白合成速度減慢,從而最大限度的提高了蛋白正確折疊的幾率,提高了蛋白可溶性表達,增強了活性蛋白的表達比率。該表達系統所包含的SUMO tag可以極大地提高小分子量蛋白的表達量,而且能進一步提高蛋白的可溶表達幾率。另外,TEE信號肽可增強冷啟動子調控下目的蛋白的高表達。
升級后的pCold-SUMO-10His載體,其SUMO蛋白標簽含有10個組氨酸標簽(10His tag),使其結合Ni-NTA的能力更強。與較早版本的pCold-SUMO表達系統相比,pCold-SUMO-10His表達系統在保留了原有系統的蛋白可溶性生產能力、高特異性剪切能力的情況下,顯著提高了與Ni-NTA的結合能力。通過與Ni-NTA結合能力的提高,在以下三個方面改善了生產重組蛋白的性能:(1)提高了粗蛋白樣品中目標蛋白的捕獲能力,從而提高純化產量;(2)在蛋白純化過程中可以使用更高濃度的咪唑進行漂洗,去雜蛋白的能力明顯提升,從而獲得更高純度的重組蛋白;(3)在重組蛋白酶切去除SUMO標簽后,利用Ni-NTA去除SUMO標簽更為徹底,獲得純度更高的無標簽目標蛋白。
pcold-sumo 載體圖譜

組分

組分名稱 數量 保存
pCold-SUMO-10His Vector (200 ng/μl) 50 μl -20℃
pCold-SUMO-10His-Positive Plasmid (20 ng/μl) 20 μl
SUMO Protease (10 U/μl) 100 μl
10×SUMO Buffer 1 ml
rTEV Protease (10 U/μl) 100 μl
20×rTEV Buffer 1ml
1700X氯霉素(34mg/ml) 1 ml
200X L-阿拉伯糖(100mg/ml) 1 ml
1000X四環素(2mg/ml) 1 ml
E.coli Transfer Reagent 1.2 ml
Lyophilized Arctic (DE3) competent cells 5支
Lyophilized BL21(DE3)Chaprone competent cells 5支

主要特征

  • 冷啟動子,低溫誘導表達,最大限度地提高蛋白地可溶性
  • 分子伴侶可協助蛋白的正確折疊
  • 可大大的提高蛋白表達量
  • 兩種宿主菌和兩種蛋白酶可選,使實驗方案更加靈活
  • 應用

    包涵體蛋白的最佳解決方法,提高蛋白的可溶性優化表達。

    實例

    pcold-sumo載體提高蛋白的可溶性表達 Fig1 . M. 中分子量蛋白Marker 1. 未誘導
    2. pET15b系統表達全菌體蛋白
    3.pET15b系統表達上清液(可溶蛋白部分)
    4.pCold-SUMO表達于BL21(DE3)全菌體蛋白
    5.pCold-SUMO表達于BL21(DE3)上清液(可溶蛋白部分)
    6.pCold-SUMO表達于BL21(DE3)chaprone全菌體蛋白
    7.pCold-SUMO表達于BL21(DE3)chaprone上清液(可溶蛋白部分)
    8.使用Ni-NTA Resin純化SUMO融合蛋白
    9.切除SUMO tag后的目的蛋白
    泳道2和3表明使用pET系統表達幾乎無可溶性蛋白表達,皆為包涵體;泳道4和5表明使用pCold-SUMO系統于BL21(DE3)菌中,可溶性蛋白表達約占40%;泳道6和7表明使用BL21(DE3)chaprone可進一步提高蛋白的可溶性表達。
    pcold-sumo對照蛋白SUMO酶切 Fig2. 分別用2 μl和5 μl的SUMO蛋白酶(C0801)對100 μg pCold-SUMO-10His-Positive Plasmid 表達所得對照蛋白進行酶切1h或3h,如圖所示。M:Protein Marker,泳道1:純化后的含SUMO標簽的對照蛋白; 泳道2:2μl SUMO Protease 酶切1h產物;泳道3:5μl SUMO Protease 酶切1h產物; 泳道4:2μl SUMO Protease 酶切3h產物;泳道5:5μl SUMO Protease 酶切3h產物。

     
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