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ssDNA/RNA 環化連接酶

產品編號 產品名稱 規格 價格(元) 說明書
D2602A ssDNA/RNA 環化連接酶 2,000U 600
D2602B 20KU 4,000
ssDNA/RNA 環化連接酶為熱穩定的DNA/RNA連接酶,不依賴于ATP,可催化單鏈DNA或單鏈RNA的環化,也可催化其分子間連接,但其對單鏈DNA的連接效率更高。環化反應中,要求催化底物單鏈DNA/RNA具有5’-磷酸基團和3’-OH基團。對于大于15nt的單鏈底物,該酶都能高效的連接。該酶還可催化DNA或RNA分子與預腺苷化的DNA接頭之間的連接,另外,在ATP過量的情況下,該酶可使DNA/RNA分子腺苷化。

組分

組分名稱 數量
ssDNA/RNA CircLigase (100 U/μl) 20 μl
10×CircLigase Buffer 250 μl
50mM MnCl2 100 μl

活性定義

60°C 1h條件下,催化1pmol 5’-磷酸化參照Oligo (55mer)完全環化所需的酶量定義為1U。

儲存

-20℃可保存3年。

使用注意事項

1. 1×CircLigase Buffer: 30mM Tris-acetate (pH 7.5), 60mM potassium acetate, 1mM DTT。
2. 添加終濃度50μM的ATP可提高環化效率,高于1mM ATP濃度會抑制連接反應。
3. 對于單鏈DNA產物的連接,需要加入終濃度2.5mM MnCl2。
4. 5’端未磷酸化的底物不能用于連接,3’端無-OH的底物不能用于連接。
5. 對于含有二級或復雜結構的連接底物,可加入0.4~0.8 M Betain以提高連接效率。
6. 該酶對底物堿基具有選擇性,5’末端連接效率: G > A >>> T (U)>>> C,3’末端連接效率T(U) > A > G,當3’端的堿基為C時不能用于連接,幾乎無連接產物。

實例

ssDNA環化連接酶
應用ssDNA/RNA環化連接酶環化52nt的單鏈DNA分子后PAGE凝膠電泳,泳道1為未加環化酶,2為加入環化酶,3為環化產物加入ExoI酶消化產物。
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